高效液相色譜柱子通常分為正相柱和反相柱。正相柱大多以硅膠為柱,或是在硅膠表面鍵合-CN,-NH3等官能團的鍵合相硅膠柱;反相柱填料主要以硅膠為基質,在其表面鍵合非極性的十八烷基官能團(ODS)稱為C18柱,其它常用的反相柱還有C8,C4,C2和苯基柱等。另外還有離子交換柱,GPC柱,聚合物填料柱等。
本文重點介紹液相色譜柱的注意事項、維修、活化方法:高效液相色譜柱在使用前,需要進行柱的性能測試,并將結果存儲起來,作為今后評價柱性能變化的參考。在做柱性能測試時要按照色譜柱出廠報告中的條件進行,只有這樣測得的結果才有可比性。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。
高效液相色譜柱的維修分為: 色譜柱的平衡、色譜柱的再生才是色譜柱的維修。高效液相色譜柱的平衡高效液相色譜柱由工廠測試后是保存在乙腈/水中的。新柱應先使用10-20倍柱體積的甲醇或乙腈沖洗色譜柱。 高效液相色譜柱的再生長期使用的色譜柱,往往柱效會下降(柱子的理論塔板數減低)。
可以對色譜柱進行再生,在有條件的實驗室應使用一個廉價的泵進行柱子的再生。在對NH2改性的色譜柱進行再生時,由于NH2可能以銨根離子的形式存在,因此應該在水洗后用0.1M的氨水沖洗,然后再用水沖洗至堿溶液完全流出。
0.05M稀硫酸可以用來清洗已污染的色譜柱,如果簡單的用有機溶劑/水的處理不能夠完全洗去硅膠表面吸附的雜質,在水洗后加用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。
色譜柱的維修.使用預柱保護解析柱(硅膠在極性流動相/離子性流動相中有一定的溶解度)。大多數反相色譜柱的pH穩定范圍是2-7.5,盡量不超過該色譜柱的pH范圍。避免流動相組成及極性的劇烈變化。流動相使用前必須經脫氣和過濾處理.如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相,應在實驗完畢柱子沖洗干凈,并保存于甲醇或乙腈中。氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性,故使用時要注意,柱及連接管內不能長時間存留此類溶劑,以避免腐蝕。
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