細胞破碎技術(shù)是指利用外力破壞細胞膜和細胞壁,使細胞內(nèi)容物包括目的產(chǎn)物成分釋放出來的技術(shù),是分離純化細胞內(nèi)合成的非分泌型生化物質(zhì)的基礎(chǔ)。
破碎方法可規(guī)納為機械法和非機械法兩大類,這篇主要介紹非機械類:
【非機械法】5、滲透壓沖擊
細胞破碎法
滲透壓沖擊是較溫和的一種破碎方法,將細胞放在高滲透壓的溶液中(如一定濃度的甘油或蔗糖溶液),由于滲透壓的作用,細胞內(nèi)水分便向外滲出,細胞發(fā)生收縮,當(dāng)達到平衡后,將介質(zhì)快速稀釋,或?qū)⒓毎D(zhuǎn)入水或緩沖液中,由于滲透壓的突然變化,胞外的水迅速滲入胞內(nèi),引起細胞快速膨脹而破裂。
6、凍融
細胞破碎法
將細胞放在低溫下冷凍(約-15℃),然后在室溫中融化,反復(fù)多次而達到破壁作用。由于冷凍,一方面能使細胞膜的疏水鍵結(jié)構(gòu)破裂,從而增加細胞的親水性能,另一方面胞內(nèi)水結(jié)晶,形成冰晶粒,引起細胞膨脹而破裂。對于細胞壁較脆弱的菌體,可采用此法。
7、酶溶
細胞破碎法
酶解是利用溶解細胞壁的酶處理菌體細胞,使細胞壁受到部分或完全破壞后,再利用滲透壓沖擊等方法破壞細胞膜,進一步增大胞內(nèi)產(chǎn)物的通透性。溶菌酶(lysozyme)適用于革蘭氏陰性菌細胞的分解,應(yīng)用于革蘭氏陽性菌時,需輔以EDTA使之更有效地作用于細胞壁。 真核細胞的細胞壁不同于原核細胞,需采用不同的酶。
8、化學(xué)
細胞破碎法
采用化學(xué)法處理可以溶解細胞或抽提胞內(nèi)組分。常用酸、堿、表面活性劑和有機溶劑等化學(xué)試劑
9、去垢劑
細胞破碎法
蛋白質(zhì)復(fù)性利用包含體與細胞碎片的密度差,用離心法將包含體與細胞碎片和可溶性蛋白質(zhì)分開,獲得了干凈的包含體,再對包含體溶解復(fù)性。這樣首先就擺脫了大量的雜蛋白、核酸、熱原、內(nèi)毒素等雜質(zhì),使后面的分離純化簡單了。從這個角度上講,包含體的形成對分離純化亦有好處。
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